Pipette與HPLC操作技巧｜精確實驗的5大必學步驟

在實驗室操作中，Pipette（移液管） 和 HPLC（高效液相層析法） 是兩種高度依賴精確性的技術工具。Pipette能保證樣品準確準量，而HPLC則用於分離、分析和檢測樣品中的化學成分。掌握這兩者的正確操作技巧，是提高實驗成功率的關鍵。本文將結合兩者的應用，分享精確實驗的5大必學步驟，幫助您輕鬆實現高效準確的數據分析。

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步驟1：選擇合適的工具與耗材

Pipette的選擇

根據實驗需求選擇正確量程的Pipette，確保吸取液體時的準確性。

移液量範圍	推薦Pipette容量
0.1 µL – 10 µL	2 µL或10 µL Pipette
10 µL – 100 µL	20 µL或100 µL Pipette
100 µL – 1000 µL	200 µL或1000 µL Pipette

HPLC的耗材選擇

1. 柱子選擇：根據分析需求選擇C18柱、正相柱或氨基柱。
2. 流動相純度：使用HPLC級試劑，避免雜質干擾。
3. 樣品瓶與過濾器：確保樣品清潔，避免管路堵塞。

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步驟2：掌握正確的Pipette操作

吸液與排液技巧

• 吸液技巧：
  1. 設定準確的吸取量。
  2. 垂直放置吸頭，將其浸入液面下2-3毫米，輕壓活塞至第一檔緩慢吸液。
• 排液技巧：
  1. 傾斜45度將吸頭接觸容器內壁，按壓活塞至第一檔排液，再按第二檔排除殘液。

避免常見錯誤

• 避免吸頭浸入液面過深或過淺，確保液體穩定吸取。
• 避免吸液速度過快，以防產生氣泡影響準確性。

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步驟3：準備高效的HPLC系統

樣品前處理

• 過濾樣品：使用0.22µm或0.45µm的過濾器，去除顆粒雜質。
• 標準曲線準備：配製標準溶液，確保定量分析的準確性。

系統初始化

1. 流動相脫氣：避免溶解氣體影響檢測穩定性。
2. 柱子平衡：以流動相預沖10-20分鐘，使柱子達到穩定狀態。

管路檢查

• 確保進樣閥、泵和檢測器無氣泡或堵塞情況。
• 定期清洗管路，避免交叉污染。

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步驟4：建立良好的實驗習慣

實驗記錄

• 詳細記錄每次Pipette和HPLC的操作參數，包括吸取量、流動相比例和檢測條件。
• 保留標準曲線與樣品數據，便於重現實驗結果。

設備校準與維護

• 定期校準Pipette，檢查密封圈與活塞是否正常。
• 按照HPLC使用手冊進行日常維護，包括清洗柱子與檢測器校準。

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步驟5：數據分析與結果驗證

數據處理

• Pipette的重複性檢測：使用相同吸取量進行多次實驗，驗證數據穩定性。
• HPLC峰值識別：通過軟件進行峰值分離與面積積分，確定化合物濃度。

結果驗證

• 將實驗數據與標準曲線進行比對，確認結果準確性。
• 若出現異常數據，檢查樣品前處理與設備是否存在問題。

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常見問題與解決方案

問題	可能原因	解決方案
Pipette吸液量不足或不穩定	吸頭未正確安裝或浸入深度不當	檢查吸頭是否牢固，調整吸液深度
HPLC峰值不穩定	流動相中含氣泡或柱子未平衡	流動相充分脫氣，柱子平衡10-20分鐘
檢測器噪音高	光源老化或樣品雜質過多	更換光源，確保樣品過濾完全

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Pipette與HPLC的精確操作是實驗成功的基石，從工具選擇到操作細節，再到數據分析，每一步都至關重要。透過本文的5大步驟，您將能輕鬆掌握這兩種工具的使用技巧，實現更高效、更準確的實驗結果。